周一早交班GeneXpe

时间：年3月29日

主讲人：贾冰冰住院医师

参加人员：感染内科全体医护

GeneXpertMRSA/SA在临床诊断中的应用

一、概述

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，SA）是当今最重要的病原体之一。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistantstaphylococcusaureus，MRSA）不仅对抗菌药物的疗效降低，而且还导致住院时间延长以及更高的感染发病率和病死率[1]。根据年中国耐药监测网监测数据，在我国金黄色葡萄球菌中甲氧西林平均耐药率为35.3%[2]。快速、准确地检测病原菌及其耐药性，有利于提高疗效，缩短疗程，延缓耐药菌株的出现。MRSA菌株因获得mecA基因，导致其编码的青霉素结合蛋白(PBP)发生了变化，进而对大多数半合成青霉素的亲和力降低，产生耐药。mecA基因整合在金黄色葡萄球菌染色体一个可移动的遗传元件(MGE)上，命名为葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)。MRSA的分子检测需要对SA特异性的靶标基因检测(nuc、gyrB或葡萄球菌蛋白A基因（spa）)以及甲氧西林耐药相关基因序列的鉴定(SCCmec-orfX、femA或mecA)[3、4]。"XpertMRSA/SA"是一种新开发的MRSA检测方法，该法在封闭的自动化集成平台（GeneXpert仪器）上进行，极大缩短了从筛查到报告检测结果的时间，约1小时完成病原检测。

二、检测原理

XpertMRSA/SA是一种基于实时PCR和分子信标技术的自动分子检测技术，可全自动直接从患者血培养物、鼻咽拭子、皮肤或组织等样本中检测SA，并同时区分MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（methicillin-sensitivestaphylococcusaureus,MSSA）。（图1）

该试验通过检测葡萄球菌蛋白A基因（spa），明确是否存在SA，同时检测耐甲氧西林/苯唑西林耐药基因（mecA）和潜入SA染色体attB位点的葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)的基因序列，进一步鉴定是否为MRSA（图2A）。新一代XpertMRSA/SA检测技术可同时检测耐药基因mecA和mecC以及新型SCCmec基因序列，增加了MRSA检测的敏感性和特异性（图2B）。mecC是在SCCmecXI移动遗传元件上的mecA的同源基因，亦导致MRSA的产生，它不能被mecA特异性PCR检测，因而可能产生假阴性的检测结果，目前mecCMRSA占人类所有新的MRSA病例的3%-4%,因此新一代XpertMRSA/SA将mecC纳入了检测靶标[5]。

图1XpertMRSA/SA血培养物检测步骤

图2GeneXpert检测MRSA的靶标

三、结果解读

SA阳性：spa探针被检出并位于有效的Ct值范围内，Ct35。MRSA阳性：spa，mecA和SCCmec探针被检出并位于有效的Ct值范围内（spaCt≤35；mecACt≤36；SCCmecCt≤38）。样本质控探针SPC在阴性样本中为阳性，在阳性样本中为阴性或阳性。若所有探针均为阴性则为无效样本。（图3）

图3GeneXpertMRSA/SA结果示意图：AMRSA阳性/SA阳性；B阴性；

CMRSA阴性/SA阳性；D无效

四、在不同临床标本中的检测性能

XpertMRSA/SA是一种快速的分子诊断手段，约1小时完成病原检测，可用于血培养物，皮肤、软组织及鼻咽拭子等多种临床标本，对常见样本的检测性能数据如下：

1、血培养物:XpertMRSA/SA试剂盒不可直接用于血液标本的检测，而是用于检测血培养阳性物，快速检测出其中的SA，并进行MRSA和MSSA鉴别。一项欧美多中心研究以直接培养法为金标准，显示XpertMRSA/SA检测SA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为%，98.6%，96.7%和%，检测MRSA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为98.3%，99.4%，96.6%和99.7%[6]。

2、皮肤及软组织拭子：XpertMRSA/SA可直接用于皮肤拭子或软组织感染拭子的检测，可指导手术前的抗生素预防治疗，减少手术部位的感染率[7]。一项多中心研究对个组织伤口拭子检测显示，以直接培养法为金标准，XpertMRSA/SA检测SA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为%，96.6%，96.5%和%。检测MRSA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为97.1%，96.2%，91.9%和98.7%[6]。

3、鼻咽拭子：多中心前瞻性研究对份鼻咽拭子标本进行XpertMRSA/SA检测，与直接培养法相比，XpertMRSA/SA检测SA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为99.3%，83.8%，81.9%和96.8%。检测MRSA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为%，95.8%，89.8%和98.0%[5]。

4、骨关节感染的应用：目前没有专门针对骨关节感染的检测试剂，但已有研究评估了XpertMRSA/SA皮肤软组织拭子在骨关节感染中的应用。一项纳入了个标本（来源于例病例）关于儿童骨关节感染的研究显示，以培养作为金标准，XpertMRSA/SA检测SA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为85%、98%、93%和95%，检测MRSA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为82%、%、%和99%[8]。

五、优点与局限性

优势：与传统培养方法相比，XpertMRSA/SA操作简单，检测效率高，可在1小时左右就得到结果，检测的灵敏度和特异性高，在检测SA的同时可以区分MRSA和MSSA。在床旁检测中具有较好的应用价值。

局限性：目前使用的引物可能无法检测到SCCmec或mecA变异菌株，发生MRSA假阴性结果。该技术检测为DNA，DNA结构稳定，无法区分死菌和活菌。

本周新词

Methicillin-resistantstaphylococcusaureus(MRSA)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

point-of-caretesting(POCT)即时检测

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